樣品RNA的抽提: ①產品僅用于科研取凍存已裂解的細胞,室溫放置5分鐘使其*溶解。 ②兩相分離 每1ml的TRIZOL試劑裂解的樣品中加入0.2ml的,蓋緊管蓋。手動劇烈振蕩管體15秒后,15到30℃孵育2到3分鐘。4℃下12000rpm離心15分鐘。離心后混合液體將分為下層的紅色酚相,中間層以及無色水相上層。RNA全部被分配于水相中。水相上層的體積大約是勻漿時加入的TRIZOL試劑的60%。③RNA沉淀 將水相上層轉移到一干凈無RNA酶的離心管中。加等體積異丙醇混合以沉淀其中的RNA,混勻后15到30℃孵育10分鐘后,于4℃下12000rpm 離心10分鐘。此時離心前不可見的RNA沉淀將在管底部和側壁上形成膠狀沉淀塊。 ④RNA清洗 移去上清液,每1mlTRIZOL試劑裂解的樣品中加入至少1ml的75%乙醇(75%乙醇用DEPCH2O配制),清洗RNA沉淀。混勻后,4℃下7000rpm離心5分鐘。 ⑤RNA干燥 小心吸去大部分乙醇溶液,使RNA沉淀在室溫空氣中干燥5-10分鐘。 ⑥溶解RNA沉淀 溶解RNA時,先加入無RNA酶的水40μl用槍反復吹打幾次,使其*溶解,獲得的RNA溶液保存于-80℃待用。 2 RNA質量檢測 1)紫外吸收法測定 先用稀釋用的TE溶液將分光光度計調零。然后取少量RNA溶液用TE稀釋(1:100)后,讀取其在分光光度計260nm和280nm處的吸收值,測定RNA溶液 濃度和純度。 ① 濃度測定 A260下讀值為1表示40 g RNA/ml。樣品RNA濃度(g/ml)計算公式為:A260 ×稀釋倍數× 40 g/ml。 產品名稱 | 魏氏無綠藻探針法熒光PCR檢測試劑盒 | 英文名稱 | Prototheca wickerhamii | 貨號 | YSP97109 |
實驗過程: 一、試劑準備 1. DNA模板 2.對應目的基因的特異引物(在PCR反應中,新合成的DNA是要接在一小段序列上才能繼續按照模板DNA復制,而不能從無到有,憑空合成。這一小段序列就是你所要有設計的引物。可以是DNA也可以是RNA,一般20多bp,需要根據你的模板鏈設計。因此,擴增不同的基因需要設計不同的引物) 3.10×PCR Buffer 4.2mM dNTPmix:含dATP、dCTP、dGTP、dTTP各2mM 5.Taq酶 二、操作步驟 1.在冰浴中,按以下次序將各成分加入一無菌0.5ml離心管中。 10×PCR buffer 5μl dNTP mixl 4μl 引物1(10pM) 2μl 引物2(10PM) 2μ Taq酶(2U/μl) 1μl DNA模板(50ng-1μg/μl) 1 μl 加ddH2O至 50 μl 視PCR儀有無熱蓋,不加或添加石蠟油。 2.調整好反應程序。將上述混合液稍加離心,立即置PCR儀上,執行擴增。一般:在93℃預變性3-5min,進入循環擴增階段:93℃ 40s → 58℃ 30s → 72℃ 60s,循環30-35次,后在72℃ 保溫7min。 3.結束反應,PCR產物放置于4℃待電泳檢測或-20℃長期保存。 4.PCR的電泳檢測:如在反應管中加有石蠟油,需用100μlLuFang進行抽提反應混合液,以除去石蠟油;否則,直接取5-10μl電泳檢測 三、注意事項 1.PCR反應應該在一個沒有DNA污染的干凈環境中進行。好設立一個的PCR實驗室。 2.純化模板所選用的方法對污染的風險有影響。一般而言,只要能夠得到可靠的結果,純化的方法越簡單越好。 3.產品僅用于科研所有試劑都應該沒有核酸和核酸酶的污染。操作過程中均應戴手套。 熒光定量PCR試劑盒技術: 本實用新型技術公開了一種實時熒光定量PCR試劑盒,包括盒體,盒體由上盒體和下盒體組成,上盒體的底面上設有限位凸起,下盒體的頂面上設有與限位凸起匹配的凹槽,且在下盒體左右側壁的下端均軟連接有側蓋,側蓋遠離下盒體的一端連接有卡勾,下盒體的上端邊緣處設有環形凸起,兩個卡勾分別勾住環形凸起的左右兩端將上盒體固定在下盒體上;凹槽的內部設有固定桿,固定桿上通過轉動件轉動連接有用于放置試管的試管架;下盒體的左右兩側均設置有收納槽。本實用新型技術通過將盒體分為上下組合的兩個部分,并將兩個部分通過側蓋連接,即可保證試劑盒的便攜性,同時使用試劑盒自帶的試管可提高檢測的效率。 客戶只需提供樣品和待檢測基因名稱即可。由我們提取RNA,設計并合成引物,完成熒光定量PCR實驗以及后續數據分析,提供實驗報告給您。 腫瘤壞死因子受體超家族成員1B(TNFRSF1B)檢測試劑盒(酶聯免疫吸附試驗法) 98% 印度農霉菌 1g 甘氨酰tRNA合成酶(GARS)檢測試劑盒(酶聯免疫吸附試驗法) 98% 塔賓曲霉 25g 氫/鉀離子交換ATP酶β肽(ATP4β)檢測試劑盒(酶聯免疫吸附試驗法) 98% *松乳菇 5g 尿卟啉原脫羧酶(UROD)檢測試劑盒(酶聯免疫吸附試驗法) 97% 烏飯樹擬莖點霉 1g 心肌肌鈣蛋白T(TNNT2)檢測試劑盒(酶聯免疫吸附試驗法) 97% 豇豆慢生根瘤菌 5g TATA框結合蛋白關聯因子13(TAF13)檢測試劑盒(酶聯免疫吸附試驗法) 98% 阪崎腸桿菌 5g 核轉錄因子Y亞基γ(NFYC)檢測試劑盒(酶聯免疫吸附試驗法) 98% 淡黃曲霉 25g 細胞程序性死亡蛋白5(PDCD5)檢測試劑盒(酶聯免疫吸附試驗法) 98% 黑曲霉 5g 類固醇5α還原酶1(SRD5α1)檢測試劑盒(酶聯免疫吸附試驗法) 97% 裂孔平伏菌 1g 白介素5受體α(IL5Rα)檢測試劑盒(酶聯免疫吸附試驗法) 97% 菊苣假單胞菌 25g Ⅴ型膠原α2(COL5α2)檢測試劑盒(酶聯免疫吸附試驗法) 97% 釀酒酵母 5g 促腎上腺皮質激素受體(ACTHR)檢測試劑盒(酶聯免疫吸附試驗法) 98% 煙酸芽孢桿菌 1g 腭/肺/鼻上皮癌關聯蛋白(PLUNC)檢測試劑盒(酶聯免疫吸附試驗法) 98% 枯草芽孢桿菌 5g 無翅型MMTV整合位點家族成員11(WNT11)檢測試劑盒(酶聯免疫吸附試驗法) 98% 釀酒酵母 100g Notch2氨基端樣蛋白(NOTCH2NL)檢測試劑盒(酶聯免疫吸附試驗法) 98% 華根霉 25g 伴刀豆球蛋白A(ConA)檢測試劑盒(酶聯免疫吸附試驗法) 98% 黃傘(可訂購) 5g 凝血酶原片段F1+2(F1+2)檢測試劑盒(酶聯免疫吸附試驗法) 98% 畢赤酵母 25g 腎上腺素能受體α2C(ADRα2C)檢測試劑盒(酶聯免疫吸附試驗法) 98% 弗氏鏈霉菌 5g 魏氏無綠藻探針法熒光PCR檢測試劑盒DNA聚合酶γ抗體CCR-7(CC chemokine receptor 7) CC趨化因子受體7(多肽)1 Kit 死亡受體5抗體CXCL10/IP-10 CXCL10趨化因子10/干擾素誘導蛋白10抗原1 Kit 橋粒芯糖蛋白4抗體VEGF(Vascular endothelial growth factor) 血管內皮生長因子(多肽抗原)100 ul 自然殺傷激活受體相關蛋白DAP12抗體CD10/CALLA (Neutral Endopeptidase) CD10抗原1 Kit 自然殺傷激活受體相關蛋白DAP12抗體ZCWCC1(Zinc finger CW-type coiled-coil domain proin 1) ZCWCC1抗原1 Kit 無精癥缺失基因4抗體CD105/Endoglin/TGF- Beta receptor CD105/轉化生長因子β受體抗原100 ul 多能發育相關基因4抗體CD138/Syndecan-1 多配體蛋白聚糖1抗原20 ul 鋅指蛋白DZIP1抗體CD146/MCAM 黑色素瘤細胞粘附分子CD146抗原1 Kit Notch信號通路Delta樣配體1抗體ANPEN/CD13(Aminopeptidase N) 氨肽酶N抗原1 Kit |