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用elisa試劑盒檢測樣本的原理和步驟

點擊次數:1972 更新時間:2010-11-24
 

用elisa試劑盒檢測樣本的原理和步驟

 

表達產物的檢測

(一)真核表達產物

1、   細胞上清(分泌性蛋白)

1.2、貼壁細胞或半貼壁,直接將細胞培養上清吸出,10000rmp x10min, 取上清,-20℃或4℃保存,作為標本進行檢測,如有需要可進行透析或純化處理;

1.2、不貼壁細胞,將培養基和細胞轉移至10ml離心管,500-800rmp x10min,吸取上清至另一10ml離心管中,10000rmp x10min, -20℃或4℃保存,作為標本進行檢測,如有需要可進行透析或純化處理;

2、   細胞裂解物(非分泌性蛋白)

2.1、貼壁細胞或半貼壁,直接將細胞培養上清吸出,然后用001M PBS(pH 7.4)將細胞吹下至10ml離心管,500-800rmp x10min,棄上清,沉淀轉移至1.5ml離心管中, DDW重懸,置冰水浴中用超聲波裂解儀進行裂解,10000rmp x10min,取上清,-20℃或4℃保存,作為標本進行檢測,如有需要可進行透析或純化處理;

2.2、不貼壁細胞,將培養基和細胞轉移至10ml離心管,500-800rmp x10min,棄上清,沉淀移至另一10ml離心管中,0.01M PBS(pH 7.4)重懸,500-800rmp x10min,棄上清,沉淀移至1.5ml離心管中, DDW重懸,置冰水浴中用超聲波裂解儀進行裂解,10000rmp x10min,取上清, -20℃或4℃保存,作為標本進行檢測,如有需要可進行透析或純化處理。

 
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